Introducción:

La emergencia de variantes farmacorresistentes de CMV bajo la presión selectiva de antivirales ha sido asociada con la presencia de mutaciones en la región codificante de la proteína quinasa, en el gen UL97, y en la región codificante para la ADN polimerasa viral en el gen UL54. Más del 90% de estas mutaciones ocurren en UL97, particularmente entre los codones 450 y 640 y entre los codones 250 al 740 del UL54. Objetivo: Presentar la metodología de estudio para la detección de farmacorresistencia de citomegalovirus a los antivirales

Materiales y Métodos:

Los estudios de farmacorresistencia se realizaron en muestras de sangre y líquido cefalorraquídeo de un receptor de trasplante renal con desarrollo de cerebelitis por CMV, ante la falta de respuesta al tratamiento con Ganciclovir (GCV). El método de elección para la detección e identificación de las mutaciones asociadas a resistencia, es la amplificación por PCR (Polimerasa chain reaction) de los fragmentos donde mapean las regiones descriptas y su posterior secuenciación y análisis genotípicos de los productos de amplificación, mediante método Sanger. El análisis nucleotídico determina la presencia o no de mutaciones asociadas a resistencia en comparación con cepas de referencia. Se aisló DNA de las muestras y se procedió a la detección cualitativa del genoma viral mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa Anidada (Nested-PCR). Se amplificaron mediante primers específicos, los fragmentos correspondientes a los genes UL97 y UL54 del Herpes Virus Humano 5 (Citomegalovirus). Los productos de amplificación obtenidos fueron purificados y sometidos a Secuenciación Sanger y posterior análisis nucleotídico bioinformático.

Resultados:

La secuencia correspondiente al gen UL97 presentó mutaciones, alguna de ellas consideradas como polimórficas y otras sin asociación con farmacorresistencia, pero se detectó además, la presencia de la mutación canónica, M460I, descripta en numerosos trabajos como seleccionada por pacientes que han recibido GCV. Las mutaciones de UL97 no afectan la susceptibilidad a foscarnet o cidofovir. El gen UL54 no presentó mutaciones asociadas a farmacorresistencia (wild type).
Previo a la recepción de los resultados, se rotó el tratamiento a foscarnet con resolución total de su cuadro y sin desarrollo de efectos adversos.

Conclusiones:

La farmacorresistencia debe sospecharse ante la falta de mejoría o ante recaídas en la enfermedad clínica o viremia, especialmente, en presencia de factores de riesgo.
Dependiendo de la severidad de la enfermedad por CMV, cambios empíricos en la terapia pueden realizarse cuando la resistencia a fármacos es sospechada, durante el procesamiento de los estudios de resistencia
Aunque los factores de riesgo de resistencia a los medicamentos están mejor definidos, es necesario realizar pruebas moleculares específicas para apoyar la elección de alternativas terapéuticas antivirales.