Introducción:
La creciente demanda de pruebas diagnosticas que confirmen la infección por el virus Sars-CoV2 ha llevado a la implementación de metodologías que sean rápidas y eficientes para poder responder al requerimiento de la situación epidemiológica.FlashPrep es una metodología que evita el proceso de extracción (cuello de botella en la inminente demanda de muestras respiratorias)realizando un primer paso de inactivación viral y luego liberación del genoma ,en menos de 20 minutos ,para posterior realización de la PCR.
Objetivos:
Comparar muestras extraídas con el sistema automatizado de rutina Mpure ® con la metodología rápida FlashPrep® mediante la reacción en cadena de polimerasa (PCR) para la detección del genoma viral de SarsCov2.
Materiales y métodos:
Se analizarán 80 hisopados nasofaríngeos de pacientes con sospecha de infección por Sars- Cov2 inactivando el virus ,liberando el genoma por FlashPrep y en simultaneo extracción automatizada por Mpure , luego se procederá a la realización de Multiplex real time PCR-DisCOVery®; para la amplificación de los genes ORF,N y CI (control interno)con 5ul y 8ul (como recomienda el fabricante)del producto final luego de la incubación con Flashprep y con 5ul del eluato del extractor automatizado. Se compararán los CT (cycle threshold) y la positividad de las muestras. Como criterio de validación se considera detectables muestras con CT >=38 para los genes ORF o N, siempre que la corrida haya sido validada con sus controles negativo, positivo y amplificación del CI en cada muestra.
Resultados:
Se analizaron 80 muestras de pacientes ambulatorios provenientes de las unidades febriles e internados en la guardia y en clínica médica del Hospital T.Alvarez.Se validaron 80 muestras con sus correspondientes controles. 26/80 resultaron positivas por FlashPrep con 5 y 8 ul y por extracción automatizada y 50 /80 muestras fueron negativas por las tres metodologías. 4 muestras fueron discordantes: 2/80 fueron positivas por FlashPrep con 5 ul y negativas por Mpure y con 8ul de FlashPrep, 2/80 fueron positivas por FlashPrep con 5ul y Mpure pero negativas con 8ul de FlashPrep. En los 4 casos discordantes, se observó señal a CT >38 hasta 41. Los CT de los CI variaron en +- 1 entre todas las metodologías.
Discusión / Conclusiones:
Se observó un excelente desempeño de la metodología rápida FlashPrep con 5 ul comparada con la metodología de rutina, lo que propone su realización en caso que la demanda de pacientes aumente de manera tal de no sobrecargar el flujo de trabajo y tener resultados rápidos y fiables en menor tiempo.
