Introducción: 

La histoplasmosis es una micosis sistémica causada por Histoplasma capsulatum. Los pacientes inmunosuprimidos (IS), pueden contraer la forma diseminada de la enfermedad (HD), la cual tiene mal pronóstico y requiere rápido diagnóstico y tratamiento. Los métodos de diagnóstico -tanto convencionales como moleculares y de detección de antígenos (Ags)- aún presentan limitaciones, por lo que deben ser optimizados y asequibles a la mayoría de los laboratorios. Los métodos de diagnóstico serológico disponibles detectan mediante inmunodifusión anticuerpos (Acs) anti-histoplasmina (HMN, mezcla antigénica compuesta por proteínas, hidratos de carbono (HC) y lípidos, de los cuales el galactomanano (GM) es el HC principal y los Ags H y M, las proteínas más abundantes). Esta técnica posee baja sensibilidad (S) en individuos IS.

Objetivos: 

Nos propusimos desarrollar ensayos de ELISA basados en distintos Ags para el serodiagnóstico de esta enfermedad y determinar la performance analítica de cada uno para poder disponer de un ELISA de detección de Acs con alta S y especificidad (E) y de bajo costo para diagnosticar la histoplasmosis, sobre todo la HD.

Materiales y Métodos: 

Se estudiaron retrospectivamente bajo aprobación del Comité de Ética del Hospital Posadas (Ref. 260 EMnP0S0/19), sueros provenientes de: 26 pacientes HIV/sida con HD probada y 96 individuos sanos. Para detectar Acs específicos se realizó un ELISA utilizando como Ags HMN comercial, GM levaduriforme (GML), GM micelial (GMM), proteína M entera (M Full) y un fragmento inmunogénico de M, denominado F1. Los Ags M Full y F1 se obtuvieron de forma recombinante en Escherichia coli, y el GM se purificó de la pared celular de ambas fases del hongo mediante un enfoque de eliminación de proteínas que incluyó ultrafiltración, digestión proteica y purificación negativa, obteniendo GM con una pureza mayor a 95%. Para los ELISA, se usó una concentración de Ag de 0,1 µg/well y en todos los casos las muestras de suero y el anticuerpo anti-IgG humana conjugado con peroxidasa, se diluyeron 1:1.000 y 1:10.000, respectivamente con PBS-leche descremada 3%. Se evaluó S y E.

Resultados: 

El ELISA con GML demostró ser el más S (96,1%) y E (94,7%) mientras que los ELISA con M Full y F1 mostraron los menores valores de S (33,3% y 88,8%, respectivamente), y una E de 99,0% y 33,6%, respectivamente.

Discusión / Conclusiones: 

El ELISA que detecta Acs anti-GML constituirá una herramienta útil para diagnosticar histoplasmosis, sobre todo HD con alta S y E.