Introducción:

La infección por dengue es un problema de salud pública importante y creciente en América Latina. Este arbovirus es transmitido por mosquitos y causa una enfermedad febril que requiere una discriminación rápida y específica. La identificación por RT-PCR se considera la técnica Gold Standard para el diagnóstico sin embargo, requiere reactivos, equipos y software complejos y costosos. Las pruebas de PCR deben realizarse en instalaciones especializadas, requieren personal altamente capacitado, y llevan un tiempo considerable, lo cual restringe la aplicación de este método.

Objetivos:

Desarrollar un test molecular simple, rápido, sensible y específico para detectar el virus del DENGUE en etapas tempranas de la infección.

Materiales y Métodos:

Se desarrolló un ensayo colorimétrico de amplificación isotérmica mediada por bucle (COLOR-RT-LAMP), un método alternativo a la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que funciona a una temperatura fija que no requiere termocicladores, y se puede realizar en tiempos cortos, mostrando resultados precisos y fiables. El método utiliza un solo tubo con cebadores específicos, transcriptasa reversa y ADN polimerasa al que se adicionan las muestras a ser estudiadas. Se evaluaron rangos de temperatura, pH, Mg y tiempo de reacción. La lectura se definió como un cambio de color –visible a ojo desnudo-, mediante la adición del colorante HNB (Hydroxy naphthol blue). La sensibilidad y especificidad del RT-LAMP se determinaron analizando muestras remanentes de diagnósticos realizados durante el periodo 2020 – 2022. Se estudiaron un total de 145 muestras de suero, incluidos 107 casos confirmados de dengue y 38 casos negativos. Así mismo, se analizaron muestras de otros arbovirus como zika, chikungunya, fiebre amarilla y virus respiratorios como Influenza, Sincicial respiratorio y COVID-19.

Resultados:

El método desarrollado permite una detección colorimétrica del genoma del virus del DENGUE mediante una incubación a temperatura constante (64-65°C) y en un tiempo máximo de 90 minutos. Los resultados mostraron que nuestra prueba ColorRT-LAMP es altamente sensible y específica. No se observó reactividad cruzada con otros arbovirus estrechamente relacionados y tampoco con otros virus causantes de estados febriles.

Discusión / Conclusiones:

El método desarrollado es específico, sensible y apropiado para ser utilizado como diagnóstico especialmente en hospitales y laboratorios que carecen de equipamiento sofisticado.