Introducción:
Clostridioides difficile (C.difficile) productor de toxinas es principal agente causal de diarrea nosocomial. La metodología de estudio utilizada habitualmente es la Inmunocromatografía (IA) que detecta la presencia de antígeno (Ag) o glutamato dehidrogenasa (GDH), presente en todos los aislamientos de C.difficile, y de las toxinas A/B. Si bien, estas técnicas poseen un elevado valor predictivo negativo (95-100%), el valor predictivo positivo de la detección de toxina (Tx) es relativamente bajo. En este caso las técnicas moleculares son de gran importancia por su alta sensibilidad y especificidad.
Objetivos:
Los objetivos del presente estudio fueron: a) La detección de C.difficile toxigénico directamente de materia fecal entre 01/01/2017 a 01/12/2018 utilizando distintas metodologías: IA, PCR real time (PCR-RT) y el cultivo anaerobio con posterior detección de la toxina por IA y PCR, considerando el cultivo toxigénico como “gold estándar”. b) La detección molecular de la toxina binaria (CDT) en aquellos aislados con deleción en el gen tcdC. c) Conocer la incidencia y características epidemiológicas de las infecciones por C.difficile (ICD).
Materiales y métodos:
Se analizaron 914 muestras consecutivas de materia fecal diarreicas de pacientes con sospecha de ICD. Todas las muestras se procesaron por IA utilizando el equipo C.Diff Quick Check Complete.
Aquellas muestras Ag+Tx- y Ag+Tx+ se analizaron por PCR-RT, que detecta la presencia del gen tcdC y su deleción, presente en todas las cepas toxigénicas e hipervirulentas respectivamente. En paralelo, las muestras se cultivaron en atmósfera anaerobia, en el medio CHROMagarTMC.difficille. La identificación de C.difficile se realizó por la metodología MALDI-TOF y la detección de toxina por EIA y PCR-RT. Se detectaron los genes cdtA/cdtB codificantes de la CDT por PCR. Para el estudio epidemiológico, se analizaron en forma retrospectiva los datos clínicos de los pacientes con ICD confirmada.
Resultados:
Del total de muestras procesadas 85,5% fueron negativas por IA. En el cultivo se aisló C.difficile toxigénico en 8,9% (81/914). Por IA, 34 muestras fueron positivas para GDH y TX (Ag+Tx+), todas ellas fueron PCR y cultivo toxigénico positivas. Además, 2 muestras Ag+Tx+ no fueron procesadas por cultivo ni PCR y 2 negativas por IA resultaron positivas por PCR y cultivo. En 97 GDH positiva y Tx negativa (Ag+Tx-), 45 dieron PCR RT+ y cultivo toxigénico positivo. En 52 muestras (Ag+Tx-), PCR-RT negativas se aisló C.difficile no toxigénico. En 12 de las 81 muestras positivas por PCR, se detectó la deleción en el gen tcdC. Estos 12 aislamiento de C.difficile toxigénico fueron positivos para los genes de CDT. De los 83 episodios de ICD documentados, 43 fueron hospitalarios, 16 asociados al ámbito de la salud, 16 comunitarios y 8 recaídas. La incidencia de ICD hospitalaria fue de 3.06 y 5.22 cada 10.000 días pacientes en 2017 y 2018 respectivamente.
Conclusión:
En base a nuestros resultados, la realización de un método molecular resulta de gran utilidad para llegar al diagnóstico de certeza, frente a resultados inconclusos (Ag+Tx-). Además, la incidencia hospitalaria concuerda con la descripta en la bibliografía.
