Introducción:

Una precisa y rápida caracterización de los mecanismos de resistencia a carbapenemes permite un mejor manejo de los pacientes (y la situación epidemiológica de cada institución) ya que existen nuevas alternativas terapéuticas específicas para microorganismos portadores de carbapenemasas.

Objetivos:

Presentar el desarrollo de una metodología para detectar KPC por MALDI-TOF MS e identificar el agente etiológico en modelos experimentales y muestras clínicas.

Materiales y Métodos:

Luego de la extracción de proteínas con solventes orgánicos se evaluó la capacidad de identificación (ID) en el rango de bajo peso molecular (PM), y de detección de KPC por MALDI-TOF MS en el rango de alto PM usando ácido sinapínico como matriz, a partir de colonia (C, n=118), botellas de hemocultivo (H, n=93) y muestras de orina (O, n=78) inoculadas artificialmente, y pátinas de crecimiento (P, n=93). Posteriormente, se aplicaron estos protocolos a muestras obtenidas de pacientes de dos hospitales: desde C (n=53), H positivos (n=86) y P (n=86), y O (n=28).

Resultados:

Las cepas control presentan un pico ~28.679 Da para KPC-2 (ausente en los controles negativos). Los resultados de los modelos experimentales fueron analizados con ClinProTools; la sensibilidad (S) y especificidad (E) para la detección de KPC desde C fue del 100%; en H: S=92% y E=100%; para P: S=86% y E=100%; y O: S=87% y E=100%. La concordancia entre la ID registrada y la obtenida por MALDI-TOF MS tras la extracción proteica fue del 100% en todos los modelos. Para las muestras clínicas se analizaron visualmente los espectros; la detección de KPC desde C tuvo una S=100% (IC95:90%-100%), E=100% (IC95:94%-100%); desde H: S=100% (IC95:83%-100%), E=100% (IC95:97%-100%); y desde P: S=100% (IC95:84%-100%), E=100% (IC95:97%-100%), en un rango de 28.655-28.740 Da. En O no desarrollaron bacterias productoras de KPC y no se observaron falsos positivos. Se logró la ID bacteriana en el 91% de los extractos, y la concordancia con la ID reportada por los hospitales fue 92%.

Discusión / Conclusiones:

Además del tremendo impacto que ha tenido la tecnología MALDI-TOF MS en la ID bacteriana, demuestra un gran potencial para detectar mecanismos de resistencia en las instituciones que lo disponen, a un costo ínfimo. La adopción de este protocolo rápido permite identificar el agente etiológico y verificar la producción de KPC desde diferentes muestras clínicas, con resultados disponibles entre 30 minutos y 1 h, adelantando resultados entre 24-48 h con respecto a los métodos tradicionales.