C. difficile es el principal causante de diarrea de origen infeccioso en pacientes hospitalizados. La incidencia y severidad de la infección por C. difficile (ICD) ha aumentado en los últimos 15 años, especialmente en el hemisferio norte, lo cual se ha atribuido a la emergencia de cepas hipervirulentas, como la BI/NAP1/027 que se caracteriza por producir las toxinas A, B y la toxina binaria CDT, así como por presentar resistencia a fluoroquinolonas (FQ).
El objetivo de este trabajo fue evaluar la presencia de las toxinas A, B y CDT en aislamientos de C. difficile, recuperados de heces diarreicas de pacientes en 2 hospitales de Buenos Aires durante marzo-noviembre de 2015, y determinar su sensibilidad antibiótica. Asimismo se proyectó identificar variantes en la región QRDR de GyrA/B y tipificar por MLST a los aislamientos productores de toxinas y/o resistentes a FQ.
Se investigó la presencia de la enzima glutamato desidrogenasa (GHD) y de las toxinas A y B en las heces empleando el kit comercial TECHLAB C. DIFF QUIK CHEK COMPLETE. Posteriormente las muestras se expusieron a alcohol 95% por 30 minutos y fueron inoculadas en medio selectivo para recuperar C. difficile. La identificación se realizó por MALDI-TOF MS. La detección de tcdA, tcdB y cdtA/cdtB codificantes de las toxinas A, B y CDT, respectivamente, se llevó a cabo por multiplex PCR según Persson et al 2008, empleando como templado ADN genómico extraído con fenol-cloroformo. La sensibilidad a levofloxaciona (LEV), moxifloxaciona (MXF), gatifloxaciona (GAT), vancomicina (VAN) y metronidazol (MTZ) se realizó de acuerdo al CLSI 2015. En aquellos aislamientos resistentes a FQ y/o productores de CDT se realizó la tipificación molecular por MLST según http://pubmlst.org/cdifficile/ y la caracterización de las regiones QRDR de GyrA/B según Spigaglia et al.
Treinta y una muestras fueron positivas para GDH. En 12/31 se detectaron las toxinas A y B por enzimoinmunoensayo mientras que por multiplex PCR 19/31 resultaron positivas para tcdA y tcdB. A su vez en 4/19 se detectó cdtA/cdtB, 2 de las cuales habían sido categorizadas como negativas para la producción de toxinas con el kit comercial. La CIM90 (µg/ml) para LEV, MXF, GAT, VAN y MTZ fueron 4, 16, 16, 0.5 y 0.5, respectivamente. La sustitución de Thr 82 por Ile se identificó en la región QRDR de GyrA de 3/4 aislamientos resistentes a FQ y en el restante no se detectaron mutaciones. Los ST identificados fueron 1, 42 y 226, así como SLV del ST 1, 42, 37/219, 26, 15 y 122.
En este trabajo se identificaron 4 aislamientos de C. difficile productores de la toxina binaria y los pacientes portadores de estos microorganismos no presentaron complicaciones asociadas a ICD. Se observó resistencia a FQ solo en 1/4 productores de CDT, observándose la sustitución aminoacídica reportada con mayor frecuencia a nivel mundial. Se identificaron distintos ST en los aislamientos CDT positivos, entre ellos el ST1 asociado a la cepa hipervirulenta BI/NAP1/027.
