Introducción:
Debido a su implicancia clínica las carbapenemasas (CAR) son el mecanismo de resistencia más relevante a los antibióticos B-lactámicos. Las CAR frecuentes en nuestro medio son KPC, NDM y OXA-48 like. Un porcentaje importante de infecciones graves por bacilos gram-negativos productores carbapenemasas (BGN-PC) cursan con bacteriemia. En estos casos la tasa de mortalidad es elevada. El diagnóstico rápido es fundamental para reducir la morbimortalidad asociada a la bacteriemia por BGN-PC.
Objetivos:
Desarrollo y evaluación de una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) multiplex para la detección simultánea de los genes blaKPC, blaOXA-48 like y blaNDM a partir de hemocultivos positivos (HCP) en los que se detectan bacilos gram-negativos (BGN).
Materiales y métodos:
Entre agosto de 2022 y marzo de 2023 se estudiaron 112 HCP en cuya coloración de Gram se observaron BGN. Las botellas de HCP se procesaron por los métodos moleculares rápidos (MMR) y convencionales (MC). Para el MMR se colocó una alícuota de 6 mL del HCP en tubo con gel separador. Luego de un lavado con agua y 2 centrifugaciones el pellet obtenido se utilizó para realizar la identificación directa por MALDI-TOF MS y la PCR multiplex. Ésta es una PCR punto final que detecta los genes blaKPC, blaNDM y blaOXA-48like previa extracción de ácidos nucleicos con agua destilada y boiling. Para el MC al HCP se realizó coloración de Gram y subcultivos en placas de agar sangre y agar chocolate. A partir del desarrollo en los subcultivos se realizó la identificación de las colonias aisladas por MALDI-TOF, sensibilidad antibiótica y PCR multiplex.
Resultados:
De las 112 muestras estudiadas, 81 fueron negativas para KPC, NDM y OXA-48, 27 fueron positivas para una CAR (22 NDM, 5 KPC) y 4 presentaron doble producción de carbapenemasas (KPC + NDM). Los gérmenes aislados productores de CAR fueron: 23 K. pneumoniae (21 NDM, 2 KPC), 3 S. marcescens (KPC) y 1 P.stuartii (NDM). Los dobles productores de CAR correspondieron a K. pneumoniae. Hubo 100% de concordancia al comparar los resultados obtenidos por los MMR y MC. No se observó falsos positivos ni negativos. El tiempo de demora (TAT) para el MMR fue de 4 horas, mientras que para el MC fue de 24-48 horas.
Discusión / Conclusiones:
El MMR implementado permite identificar correctamente a nivel de especie, además de detectar o descartar la presencia de las CAR más frecuentes en nuestra población, en un corto periodo de tiempo luego que el hemocultivo se positiviza.
