Introducción: 

Desde el año 2018 hasta la actualidad se han notificado brotes de Salmonelosis en la Provincia de Salta, con incremento de casos confirmados. Dado el contexto de la pandemia de COVID-19 que tuvo lugar en el 2020, el sistema de vigilancia epidemiológica ha enfocado los boletines integrados hacia la actualización de la situación de eventos priorizados relacionados principalmente con enfermedades respiratorias. Los cuadros clínicos de ambas infecciones son muy similares, por lo que deja a discusión el diagnóstico diferencial de cada una para llevar a cabo el tratamiento apropiado. De allí que surge la necesidad de diseñar un sistema de detección molecular que permita discriminar, los agentes etiológicos para un diagnóstico rápido y tratamiento específico. La fase de aplicación exige diferentes etapas previas, entre ellas diseño (in silico), validación, estandarización y optimización (in vitro).

Objetivos: 

Discriminar en un mismo ensayo la presencia de SARS-CoV-2 y Salmonella sp mediante reacciones de PCR en tiempo real y determinar el Límite de Detección (LoD) del sistema múltiplex.

Materiales y métodos: 

Se empleó un sistema (cebador y sonda) que permitió detectar el gen N de SARS-CoV-2 y un gen de virulencia presente en Salmonella sp. (MG-S), este último diseñado en el Laboratorio de Investigación y Diagnóstico Genético. Se utilizó ADN plasmídico (ADNp), nCoV-ALL-SARS-CoV2 y pGEM®-T Easy-Salmonella como controles positivos. Se construyó una curva estándar, incluyó 8 puntos de las diluciones sucesivas 1:10 del ADNp lineal. Los puntos de la curva se ajustaron a una recta mediante regresión lineal. A partir de la pendiente de la curva estándar, se determinó la eficiencia de la reacción de amplificación (E). El coeficiente de correlación R^2 obtenido en la regresión lineal fue utilizado para determinar la linealidad del ensayo.

Resultados: 

Se amplificaron los marcadores moleculares en todos los puntos. Se obtuvo una curva con un rango dinámico de 7 órdenes de magnitud para el sistema multiplex, donde el R^2 fue > 0.98 para los genes en estudio y la eficiencia de amplificación fue del 94% (gen N) y 98% (MG-S). El LoD para los marcadores fue >1×10^2 cg/mL.

Discusión / Conclusiones: 

El sistema combinado para la detección y diferenciación de los agentes patógenos presenta alta sensibilidad y especificidad. Este tipo de sistema proyecta una alternativa de diagnóstico molecular para patógenos que presentan similar evolución clínica, pero muy diferente tratamiento médico.