La combinación de ceftazidima/avibactam (CZA) representa una de las pocas alternativas para el tratamiento de las infecciones por bacterias gram negativas productoras de serino-carbapenemasas. Las pruebas de diagnóstico rápido para detectar bacterias resistentes a los carbapenemes son de importancia para definir tanto una terapia antibiótica temprana, como para definir conductas epidemiológicas. Sin embargo, estos métodos en general no diferencian variantes de KPC, especialmente aquellas asociadas a la resistencia a CZA. En este ensayo nos propusimos detectar y diferenciar la producción de distintas variantes de KPC en enterobacterias mediante el uso de MALDI-TOF MS.
Se incluyeron 20 aislamientos clínicos resistentes a carbapenemes: 6 cepas productoras de KPC-2[K. pneumoniae (3), E. coli (2), S. marcescens (1)] y 14 K. pneumoniae, de las cuales 5 son productoras de KPC-3 y 9 son resistentes a CZA por producción de KPC-31 (4), KPC-8 (1) ó NDM-1 (4). Una cepa recombinante y otra electroporante para blaKPC-2 fueron usadas para definir el pico correspondiente a la proteína madura de la enzima. Las cepas receptoras, K. pneumoniae ATCC 700603 y otras productoras de NDM-1 se usaron como controles negativos. El equipo fue calibrado con un estándar propio del método empleado en el espectrómetro de masas. La adquisición de los espectros se realizó a partir de colonia posterior a extracción de proteínas con solvente orgánico en el rango de 17000-50000 Da usando la matriz de ácido sinapínico. Los espectros adquiridos se analizaron en los programas flexAnalysis y clinProTools.
El análisis visual de los espectros permitió identificar 4 picos de mediana intensidad en diferentes posiciones con relación a su masa-carga, localizados en 28658 Da, 28668 Da, 28720 Da y 28770 Da para las variantes KPC-8, KPC-2, KPC-3 y KPC-31, respectivamente. Usando el algoritmo ““Supervised Neural Network”” se generó un modelo de análisis independiente para cada una de las variantes de KPC, pudiendo clasificar los aislamientos de forma automática con una sensibilidad y especificidad del 100%.
Estos resultados preliminares sugieren que MALDI-TOF MS podría ofrecer una metodología rápida y alternativa para la detección y discriminación entre las dos variantes de KPC de mayor circulación a nivel mundial (KPC-2 y KPC-3). Si bien el número de aislamientos es bajo, también se logra diferenciar variantes que confieren resistencia a CZA reportadas recientemente en Argentina (KPC-8 y KPC-31).
