Introducción:

Pseudomonas aeruginosa (PAE) causa infecciones difíciles de tratar debido a la resistencia natural a múltiples antibióticos sumado a su notable capacidad para adquirir nuevos mecanismos, dejando escasas opciones terapéuticas. Los principales mecanismos involucrados en la resistencia adquirida a los antibióticos ß-lactámicos podemos dividirlos en aquellos de naturaleza enzimática (producción ß-lactamasas) y aquellos no enzimáticos (sistemas de eflujo, impermeabilidad y/o mutación en sitios blancos). En particular, entre los mecanismos que afectan a los carbapenemes se destacan la impermeabilidad mediada por déficit en OprD, eflujo del tipo MexAB–OprM y producción de carbapenemasas, como metalo-ß-lactamasas (MBL). Estos mecanismos suelen expresarse de manera simultánea por lo que resulta difícil predecir el genotipo de resistencia en base al fenotipo observado en el antibiograma.

Objetivos:

Evaluar la eficiencia de la colocación estratégica de discos en la detección de beta-lactamasas en PAE. Investigar la presencia de los genes codificantes de las beta-lactamasas más frecuentes en esta especie.

Materiales y Métodos:

Se estudiaron todos los aislamientos de PAE recuperados en hospital T. Alvarez en el período enero-diciembre 2017.De un total de 76 aislamientos, 36 presentaron resistencia a algunos de los siguientes antibióticos ß-lactámicos: ceftacidima (CAZ), cefepime (FEP), piperacilina-tazobactam (PTZ), imipenem (IMI), meropenem (MERO), por Vitek2. En estos aislamientos se llevó a cabo la búsqueda de ß-lactamasas por ensayos por difusión, empleando la ubicación estratégica de discos recomendada por la subcomisión de antimicrobianos. A su vez, en todos ellos se investigó la presencia de los genes bla-CTX-M, bla-GES, bla -VIM, bla-IMP, bla-NDM y bla-KPC. Se secuenciaron los fragmentos amplificados y para el análisis de las secuencias se emplearon las herramientas bioinformáticas blastn y Expasy.

Resultados:

Respecto a los ensayos fenotípicos: En ningún caso se observó sinergia entre CAZ y CAZ/CLA ó FEP y CAZ/CLA, indicativo de la presencia de una BLEE tipo CTX-M. No se observó en ningún caso sinergia entre los carbapenemes y EDTA, indicativo de una MBL. En un aislamiento se observó sinergia entre CAZ e IMI indicativo de la presencia de una enzima de tipo GES. Todos los aislamientos dieron resultados negativos para la detección molecular de estos genes codificantes de carbapenemasas de tipo VIM, IMP, NDM y KPC. Respecto a los genes codificantes de BLEE, en un aislamiento se obtuvo amplificación positiva para blaGES, de manera coincidente a lo observado en el ensayo fenotípico. El amplicón obtenido presentó un 99% de identidad con GES-1, y o 100 %de identidad con GES-1.

Discusión / Conclusiones:

La colocación estratégica de disco presentó un 100% de eficiencia en la detección de las beta-lactamasas analizadas. Sólo fue detectada la presencia de GES-1, la cual corresponde al primer reporte en nuestro hospital.La producción de carbapenemasas no fue responsable de la resistencia a carbapenemes (47%) observada en estos aislamientos.