Introducción
El fallo virológico bajo rango de carga viral, representa un desafío. El bajo número de copias de ARN en plasma dificulta la detección y el estudio de variantes resistentes. En este trabajo proponemos un protocolo para analizar mutaciones de resistencia en estos casos.
Materiales y Métodos
Se evaluaron 3 casos de individuos con carga viral plasmática detectable pero < 200 copias/mL en más de 3 determinaciones. Se obtuvieron 60-80 mL de sangre periférica, lo que permitió la ultracentrifugación de 14-30 mL del plasma (100,000xg 120 min). El pellet conteniendo las partículas virales concentradas se resuspendió en 1-2 mL, y fue utilizado para la posterior amplificación y secuenciación. Se realizó una PCR anidada de punto final, inicialmente una RT PCR con primers específicos para la región Pol, que amplifican para los genes de la proteasa, transcriptasa inversa y la integrasa. Se secuenció por Sanger y se estableció la secuencia consenso para los distintos genes. Finalmente se evaluó la resistencia mediante las bases de datos de la Universidad de Stanford “HIV drug resistance database” y “RECall”.
Resultados
Se logró la amplificación de al menos una de las regiones diana en los 2 individuos que presentaron CV detectable al momento de la toma de la muestra. En el tercer caso la CV plasmática fue <40 copias/mL y no fue posible la secuenciación viral. En la tabla 1 se describen las características de los tres participantes, el resultado de la secuenciación de las regiones de la proteasa, transcriptasa inversa e integrasa, y el análisis de mutaciones de resistencia.
En el caso 1 fue posible obtener las secuencias de los genes de la proteasa, transcriptasa inversa e integrasa, en el caso 2 se obtuvo la integrasa, y en el caso 3 no fue posible secuenciar.
Conclusiones
Este trabajo es una prueba de concepto que demuestra la posibilidad de obtener las secuencias de la proteasa, la transcriptasa inversa y la integrasa mediante secuenciación por Sanger en individuos con fallo a bajo rango, a pesar del bajo número de copias de ARN de VIH en plasma. Este protocolo podría ser una herramienta útil para estudiar la resistencia en estos casos y determinar esquemas antirretrovirales apropiados en quienes se detecte la presencia de mutaciones de resistencia. En los casos reportados no se detectaron las mismas, remarcando la existencia de otros factores asociados al fallo (como la adherencia, interacciones de drogas, etc).
