Introducción:
El algoritmo actual de diagnóstico de enfermedades transmitidas por mosquitos en pacientes con cuadros de síndromes febriles agudos se basa en el estudio secuencial en suero de virus Dengue (DENV) a través de antígeno NS1 (Ag NS1), y Zika (ZIKV) y Chikungunya (CHIKV) por RT-PCR en tiempo real (qRT-PCR). Pasados los 5 días del inicio de síntomas (IS), el diagnostico se basa en la detección de IgM y puede requerir una segunda muestra para estudios de neutralización. Existen plataformas que permiten la detección molecular de los tres virus de forma individual o simultánea que permiten optimizar el diagnostico especialmente en las áreas de cocirculacion.
Objetivo:
Analizar el desempeño del ensayo de RT-PCR en tiempo real Modular DX Kit (TIB MOLBIOL) en formato multiplex para DENV, ZIKV y CHIKV en la plataforma Z 480 (Roche) y estandarizar el ensayo para muestras de orina y semen.
Materiales y métodos:
Se analizaron un total de 53 muestras (40 sueros, 12 orinas y 1 semen) correspondientes a 40 pacientes con síndrome febril agudo del periodo 11/2014- 03/2017. El diagnóstico de los pacientes incluidos fue: 21 pacientes negativos para los tres virus (que se correspondieron con 21 sueros y 4 orinas), 10 DENV (9/10 Ag NS1+, Platelia- Biorad y 1/10 DENV IgM, Panbio) En el paciente con IgM y en 2/9 con AgNS1+ se obtuvo por lo menos 1 muestra de orina representando un total de 10 sueros y 4 orinas. En 8 pacientes el diagnóstico fue de CHIKV (q RT-PCR LightCycler 2.0) y se correspondieron con 9 muestras de suero y 1 diagnóstico de ZIKV (qRT-PCR Genesig, Abi 7500) que se correspondió con 1 suero, 4 orinas y 1 semen. Los 53 extractos de ácidos nucleícos, conservados a -70°C fueron re analizados en la plataforma Z480 y los resultados comparados con los previos mediante cálculo de concordancia (kappa) sobre un total de muestras para DENV 31 y 33 para ZIKV y CHIKV. Se calculó además la mediana del tiempo IS al momento del diagnóstico para muestras de suero y orina
Resultados:
Para DENV el grado de concordancia fue 92,4%, (K=0.924), siendo más sensible que el ensayo AgNS1 (10/10 vs 9/10 respectivamente). Las 4 orinas fueron detectadas en Z480 (rango CP: 25-33). La mediana de tiempo al IS para DENV en muestras de suero fue 5 (RIC: 2-11) versus 13 (RIC: 8-18) días en orina. Para CHIKV el grado de concordancia fue 100% (K: 1) todos los sueros fueron detectables (rango CP: 25-36), y la mediana de tiempo al IS de 5 días (RIC: 1-7). Para ZIKV el grado de concordancia fue 100% (K: 1) las muestras fueron detectables en un rango CP: 30-37. Para el paciente con ZIKV, el suero fue positivo en el día 5, la orina en el día 6,13 y 20 y el semen en el día 24. No se detectaron coinfecciones.
Conclusiones:
La plataforma Z480 permitió la detección simultánea de los tres virus con una sensibilidad equivalente para los virus de CHIKV y ZIKV en los tres tipos de muestras utilizados, y con mayor sensibilidad que el Ag NS1 de DENV. La nueva plataforma permite trabajar con muestras de orina y semen, permitiendo en DENV y en ZIKV el diagnostico en pacientes con más de 10 días de evolución, evitando la necesidad de una segunda muestra.
