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524-P
XXIII CONGRESO SADI 2023

NUEVO SISTEMA DE PCR EN TIEMPO REAL PARA LA IDENTIFICACIÓN SIMULTÁNEA DE LAS CARBAPENEMASAS KPC, NDM, VIM, IMP Y OXA-48-LIKE EN ENTEROBACTERALES

ALBORNOZ, Ezequiel SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”RAPOPORT, Melina SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”MARTINO, Florencia SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”SANZ, Maria Belen SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”MENOCAL, María Alejandra SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”DE MENDIETA, Juan Manuel SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”PASTERAN, Fernando SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”PETRONI, Alejandro SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”CORSO, Alejandra SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”ECHEGORRY, Mariano Paulo SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”FACCONE, Diego SERVICIO ANTIMICROBIANOS INEI-ANLIS “DR. C. G. MALBRÁN”

 

Introducción:

El aumento de la prevalencia de patógenos extremadamente resistentes a los antimicrobianos, y en particular los aislamientos de Enterobacterales productores de carbapenemasas (CBPs) es un desafío para los sistemas de salud. Una consecuencia tecnológica de la pandemia por COVID-19 es la adquisición de equipamiento de PCR en tiempo real (qPCR) por las instituciones de salud, el cual puede ser utilizado para la detección e identificación temprana de CBP.

Objetivos:

Poner a punto un sistema de detección e identificación de las principales CBP de Enterobacterales analizando las curvas de mealting de los productos de amplificación obtenidos por qPCR multiplex.

Materiales y Métodos:

Para las reacciones de qPCR se utilizó la mezcla MeltDoctor®HRM (Applied Biosystems) en un volumen final de 20uL. Se utilizaron los primers (concentración) de Monteiro J. et. al. 2012. (doi:10.1093/jac/dkr563) para amplificar blaKPC (0,2mM), blaNDM (0,4mM) y blaOXA-48-like (0,2mM). Se diseñaron los primers para blaVIM (0,2mM), VIM-RT-F AGTGGTGAGTATCCGACAG; VIM-RT-R ATGAAAGTGCGTGGAGAC; y blaIMP (0,6mM) IMP-RT-F GAGTGGCTTAATTCTCRATC; IMP-RT-R GGYARCCAAACCACTASGTTATCT. Se utilizó el equipo AriaMX System (Agilent), la curva de mealting se realizó con una resolución de 0,2°C/5 segundos. Se utilizaron 38 Enterobacterales con las variantes de CBP más frecuentes en nuestro país. Los aislamientos presentaban entre 1 y 3 genes de CBPs. La extracción de ADN se realizó por la técnica de boiling.

Resultados:

Los 38 aislamientos rindieron amplificación positiva entre los ciclos 12,68 y 24,1. Se definió un Ct máximo de 25 ciclos para considerar amplificación positiva. Para cada gen se obtuvo un rango de temperatura de mealting (T°m) acotado, salvo para KPC que tuvo el rango más amplio de 1,32°C (Tabla). No se solaparon los rangos de T°m definido para cada gen. La presencia de múltiples CBPs pudieron ser correctamente identificadas.

Discusión / Conclusiones:

El sistema basado en el análisis de productos de qPCR aquí presentado permitió la correcta detección e identificación de las variantes de CBP más comunes de Enterobacterales de nuestro país. La detección de variantes inusuales puede dar perfiles de T°m por fuera de los rangos obtenidos, por lo que deberían ser contrastados por otra técnica o derivados a un laboratorio de referencia. La correlación entre la fenotipia y la detección molecular debería ser monitoreada. La identificación temprana del tipo de CBP en infecciones severas tiene un impacto directo sobre la optimización del tratamiento.

Tomas Anderson

Acerca de Tomas Anderson

ASEI - Fundacion Huesped - SADI

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Sitio de divulgación de Fundación Huésped y la Sociedad Argentina de Infectología que contiene la revista Actualizaciones en Sida e Infectología (ASEI). Además, ofrece información de interés general sobre la temática y pone a disposición de la comunidad un buscador de trabajos científicos presentados en los congresos organizados por la SADI.

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