Introducción: 

Ceftazidima/avibactam (CZA) es una excelente opción terapéutica frente a infecciones severas causadas por Enterobacterales (ETB) productores de carbapenemasas del tipo serín enzimas como KPC y OXA-48-like. Las variantes enzimáticas más frecuentes de KPC, KPC-2 y KPC-3, presentan fenotipo de sensibilidad a CZA. Sin embargo, mutaciones en blaKPC-2 y blaKPC-3 pueden generar variantes alélicas con perfiles inusuales de difícil caracterización fenotípica al presentar mayoritariamente resistencia a CZA y, eventualmente, sensibilidad a carbapenemes (efecto “see-saw”). El sistema GeneXpert®-Xpert Carba-R (XCR), es una PCR multiplex automatizada en tiempo real que permite la detección en menos de 1 hora de los 5 genes de carbapenemasas más frecuentes: KPC, NDM, IMP, VIM y OXA-48-like en ETB, Pseudomonas aeruginosa y Acinetobacter baumannii. La validación de un método es el proceso por el cual se establece, por medio de estudios de laboratorio, que es adecuado para el uso previsto.

Objetivos: 

Verificar si XCR cumple con criterios de aceptabilidad de sensibilidad (SE), especificidad (ES), y precisión (PR) para la detección de mutantes de KPC responsables de fenotipos inusuales como la resistencia a CZA.

Materiales y Métodos: 

Se evaluó el desempeño de XCR con una colección de 18 cepas resistentes a CZA, procedentes del repositorio del Servicio Antimicrobianos del INEI-ANLIS Malbrán: 17 K. pneumoniae (KPN) y 1 K. aerogenes, productoras de las siguientes variantes de KPC: 14, 25, 31, 33, 44, 57, 73, 80, 81, 96, 97, 161, 162, 163, 164, 165 y dos nuevas mutantes en proceso de asignación alélica. Adicionalmente, se evaluó KPC-160, variante alélica inusual de KPC-2, en un aislado de KPN con sensibilidad borderline a CZA (CIM 4/4 mg/L) y sensibilidad a meropenem (CIM <= 0,06 mg/L). Las mutantes de KPC fueron caracterizadas por PCR in-house, secuenciación de Sanger y/o WGS. El ensayo se realizó partiendo de un cultivo puro (directo de colonia), según indicaciones del fabricante. Se consideraron aceptables valores de SE, ES y PR >= 95%.

Resultados: 

XCR detectó todas las variantes de KPC evaluadas en Klebsiella spp. con SE, ES y PR de 100%.

Discusión / Conclusiones: 

El desempeño del XCR resultó aceptable con valores de SE, ES y PR >=95%. Su utilización en los laboratorios de microbiología clínica permite la detección de mutantes de KPC con fenotipo inusual, como la resistencia a CZA. La correcta detección de estas mutantes junto con el antibiótico resulta crucial para la instauración del tratamiento antimicrobiano apropiado, y para la intervención inmediata del PCI en la contención de estos microorganismos MDR.